通用名称：非洲猪瘟病毒野毒株、疫苗株双重荧光PCR核酸检测试剂盒

英文名称：Dual Fluorescence PCR detection Kit for wild and vaccine strains of African swine fever virus

用于非洲猪瘟病毒野毒株和疫苗株的鉴别检测；适用于猪血液、脾脏、肝脏、淋巴结、扁桃体、肾脏、肌肉等样品中非洲猪瘟病毒核酸的检测。

基线及阈值设定:根据仪器自动分析结果。如果曲线发生异常时，调整基线，起始值一般可在 3~15范围内调节，终止值一般可在 5~20范围内调节；阈值：根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线的最高点，且相交于阳性对照扩增曲线进入指数增长期的拐点。每个样品反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数即为Ct值。

1. 试剂盒有效性判定

阳性对照在FAM和VIC通道均有典型扩增曲线且Ct值≤35，且阴性对照在FAM和VIC通道均无Ct值、无扩增曲线，则试验结果有效；否则，此次试验视为无效。

2. 被检样本结果判定

（1）当待检样品仅FAM通道出现典型扩增曲线且Ct值≤40，VIC通道无扩增曲线时，判定为非洲猪瘟野毒株核酸阳性，非洲猪瘟病毒疫苗株核酸阴性。

（2）当待检样品FAM、VIC通道均出现典型扩增曲线且Ct值≤40时，判定为非洲猪瘟病毒疫苗株核酸阳性。

（3）当待检样品FAM、VIC通道均无扩增曲线且无Ct值时，判为非洲猪瘟野毒株核酸、疫苗株核酸均为阴性。

（4）当待检样品VIC通道出现典型扩增曲线且有Ct值，而FAM通道无扩增曲线时，可能是操作过程中样品受到污染所致，应重新提取样品核酸再次检测。若检测结果仍为VIC通道出现典型扩增曲线且有Ct值，FAM通道无扩增曲线，则判定为非洲猪瘟野毒株、疫苗株核酸阴性。

1. 为确保检测结果的准确性，建议先使用非洲猪瘟病毒核酸荧光PCR检测试剂对样本核酸进行检测，选择FAM通道Ct值≤30的样品用本试剂盒进行非洲猪瘟病毒疫苗株的鉴别检测。

2. 实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以获得最好的结果。

3. 实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。

4. 核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase，提取过程尽量低温、快速，完成后进入下一步实验或冻保。

5. 对于顶部采光仪器要带新的一次性PE手套对荧光PCR管封盖，对于底部采光仪器要避免徒手或使用过的手套接触荧光PCR管底，检测过程中使用不带荧光物质一次性乳胶手套。

6. 冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响试剂性能。

7. 样品、阳性对照等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。

8. 扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR实验室进行无害化处理。